电泳涂装常见故障及解决方法 western电泳条带跑成这样,胶出了什么问题?

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电泳涂装常见故障及解决方法

western电泳条带跑成这样,胶出了什么问题?

western电泳条带跑成这样,胶出了什么问题?

跑westernblot时电泳时的条带呈斜行原因很多主要可能是电泳凝胶配制时未搅拌均匀,造成条带未能直线跑完电泳凝胶中混入气泡,造成条带被挤压倾斜也可能是样品缓冲液有干扰,造成条带迁移率不统一另外上样量过大,被其他泳道挤压也有可能

sds电泳常见问题分析?

1.关于凝胶的一些问题
胶的凝结不好,例如有花纹特别是浓度高的胶在冬天温度较低的情况下,在分离胶的下部有波浪样的花纹,凝胶不均匀。解决方法:加大TEMED和过硫酸胺的量,使其凝结速度加快。同时洗干净玻璃板,防止有残留的胶干结在玻璃板上。胶不凝,解决方法:
温度较低时加大TEMED和过硫酸胺的量,过硫酸胺必须新鲜配制。如若还是不行重新配制一下缓冲溶液。
胶易碎,例如浓度较高的胶在染色和脱色过程以及扫描过程中破裂。
解决方法:首先在上述过程中一定要动作轻缓,其次在室温较高的情况下可以适当减少TEMED和过硫酸胺的量。
电泳完后胶上有很多长条纹的杂带,解决方法:建议电泳缓冲液不要回收利用。配制胶的溶液一定要纯。
2.凝胶时间不对
通常胶在30分钟到1小时内凝。如果凝的太慢,可能是TEMED,AP剂量不够。 如果凝的太快,可能是AP和TEMED用量过多,此时胶太硬易裂,电泳时易烧胶。
3.浓缩胶与分离胶断裂、板间有气泡对电泳的影响。
前者主要原因是拔梳子用力不均匀或过猛所致;后者是由于在解除制胶的夹子后,板未压紧而致空气进入引起的,一般对电泳结果不会有太大的影响。
4.样品的处理
根据样品分离目的不同,主要有三种处理方法:还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。
5.条带两边翘起中间凹下的原因
在较厚的凝胶中,由于凝胶不均匀冷却,中间部分凝固不好。电泳系统温度偏高。
处理办法:待其充分凝固再作后续实验。
6.条带两边向下中间鼓起的原因
一般原因是两板之间的底部间隙气泡未排除干净,或聚合不完全。
处理办法:可在两板间加入适量缓冲液,以排除气泡。
7.条带偏斜
原因:电极不平衡或者加样位置偏斜。
8.条带两边扩散
原因:加样量过多。
9.电泳的条带过粗
电泳中条带很粗是常见的事,主要是浓缩胶的原因。
处理办法:适当增加浓缩胶的长度;保证浓缩胶贮液的pH正确;适当降低电压。